1、ELISA试验中样品都要做复孔或三孔，然后计算每个浓度规范品的均匀OD值，复孔的变异系数应该小于20%。

2、均匀OD值减去空白孔的OD值。

3、制造规范曲线。

以减去本底后的OD值为X轴，规范品的浓度为Y轴，运用作图软件得出一个适宜的计算办法。主张运用适宜的软件来作图，比方CurveExpert 1.4。这款软件能够给出许多种办法(比方直线、半对数、对数、四参数方程等)并从中挑选一条最适宜的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据符合，能够将规范品的浓度作为未知数，将对应的OD值带入该方程，计算出规范品的浓度，得到的成果应该与实际浓度很挨近(+/-10%)。挑选拟合度的那条曲线。

如果呈现规范曲线的线性欠好，或平行性欠好(双孔对照孔的OD值不同很大)，或呈现跳孔的现象，可能引起的原因有酶标板孔间彼此污染、洗板后未能尽快进行下一步操作、添加样品或其它试剂时操作的办法不对、孵育位置避光性不佳或盖板膜没有密封好使得水分蒸腾、酶标板孔问参加的试剂量不同，相对应的解决办法是加样时请当心勿将液体溅人另一孔中，人工洗板时也请当心，勿将洗涤液溅人另一微孔中、在洗板后及时进行下一步操作、添加试剂时请悬空滴入，牢记勿将枪头接触到板孔内，吸取不同试剂瓶中的液体时就要替换一次枪头、确认孵育环境不透光，盖板膜将酶标板密封好、运用已校正过的微量加样器，如将次参加液体时枪头上留有一滴的液体滴下，那么将今后枪头上留有的液体也滴下，以保证参加液体体积的一致性。