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检测细胞凋亡的三种常用方法
文章来源:江苏菲亚生物科技有限公司   添加时间:2020/10/27 9:25:46 点击率:312

一、形态学观察方法

1.HE染色、光镜观察:凋亡细胞呈圆形,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状,细胞表面有“出芽”现象。

2.丫啶橙(AO)染色,荧光显微镜观察:医学教/育网搜集整理活细胞核呈黄绿色荧光,胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧,可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。

3.台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。

4.透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

二、DNA凝胶电泳

1.检测原理

细胞发生凋亡或坏死,其细胞DNA均发生断裂,细胞内小分子量DNA的片断增加,高分子DNA减少,胞质内出现DNA的片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间,出现180-200bpDNA的片断,而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断,利用此特征可以确定群体细胞的死亡,并可与坏死细胞区别。

2.结果判断

正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状(LADDER)条带;坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。


三、酶联免疫吸附法(ELISA)核小体测定

凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA的片断组成,可由ELISA法检测。

1.检测步骤

1.1.将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体;

1.2.在微定量板上吸附组蛋白体;

1.3.加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合;

1.4.加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合;

1.5.加酶的底物,测光吸收制。

2、用途

该法敏感性高,可检测5*100/ml凋亡细胞。可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。该法不需要特殊仪器,适合基层工作,但是不能测定凋亡细胞发生的绝多对量。

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